Consellos básicos para a criopreservación dos cultivos celulares

Consellos básicos para a criopreservación dos cultivos celulares

As células continúan o seu metabolismo durante as actividades normais de crecemento, o que require a participación de diversas proteasas. Cando a temperatura baixa por baixo dos -70 ° C, as proteases deixan de funcionar. Polo tanto, nun ambiente con temperaturas extremadamente baixas, as células poden parar as súas actividades metabólicas e entrar nun estado durmiente que permita o almacenamento a longo prazo.

1. Materiais experimentais

Material base:

Medio de cultura básica

Serum (FBS/NBS convencionais)

Banco de traballo ultrapure

Sulfóxido de dimetilo estéril (DMSO)

Solución de sal buffer de fosfato PBS estéril

Pistola de canalización

Pistola de canalización eléctrica

Preparación dos experimentos

a) Preparación da solución de conxelación:

Células xerais: 55% medio basal + 40% soro bovino (FBS/NBS) + 5% DMSO

Células vitais: soro bovino do 90% (FBS/NBS) + 10% DMSO

Aliquot A solución de criopreservación preparada nun tubo de centrífuga de 15 ml [niño] e almacenar a 4 ° C para o seu posterior uso.

(b) Preparación de células a conxelar:

Antes de conxelar as células, selecciona células con bo estado de crecemento e na fase de crecemento logarítmico e substitúelos por medio fresco 12-24 horas antes da conxelación para manter a condición celular.

2. Procedemento experimental

1. Observe a densidade das células que se conxelarán, o que supón aproximadamente o 80%~ 90%. Use unha pistola de pipeta para aspirar o medio antigo, engadir PBS estéril para lavar as células 1-2 veces e eliminar o medio restante no ambiente de cultivo.

2. Engade unha cantidade adecuada de tripsina ou zume dixestivo para permitir que a tripsina entre nas células e coloqueas na incubadora para a dixestión. Observa a condición das células ao microscopio: o citoplasma está retractando e as células xa non están conectadas a follas. Neste momento, engade a solución de parada para deter o proceso de dixestión.

3. Bufete suavemente as células cunha punta para formar unha suspensión celular e centrifugar a suspensión da célula a 1000 rpm durante 3-5 minutos.

Descarta o sobrenadante, engade unha cantidade adecuada de solución de conxelación e pipeta suavemente para que as células contasen uniformemente. Axuste a densidade celular con medio de criopreservación para facer a densidade final 5 × 106/ml ~ 1 × 107/ml.

4. Use unha pistola de pipeta para separar os tubos criogénicos segundo a capacidade esperada e use unha máquina de captura automática para tapar e selar.

5. O programa estándar de criopreservación é unha velocidade de refrixeración de -1 ° C a -2 ° C/min, e as células que se conxelarán pódense conxelar gradualmente segundo os seguintes pasos: temperatura ambiente → 4 ° C (20min) → - 20 ° C (30 minutos) → -80 ° C ° C (durante a noite) → Almacenamento a longo prazo en nitróxeno líquido.

Tamén se pode almacenar directamente nun conxelador a -80 ° C durante a noite e logo transferirse ao nitróxeno líquido para o seu almacenamento.

Yongyue Medical é unha empresa de alta tecnoloxía especializada en I + D, produción e vendas de consumibles biomédicos. Consellos de pipeta, pipetas, placa de PCR, produtos de cultivo celular e outros consumibles de laboratorio biolóxicos. Yongyue Medical é digno da túa confianza e elección. Benvido a consultar!