Problemas de selado e contaminación en placas de cultivo de células multiwell

Cargando e manipulación de placas de cultivo de células múltiples:

A placa de cultivo celular tamén segue o principio de asepsis estrita ao realizar operacións celulares. Todas as operacións deben estar normalizadas e científicas e non causarán impacto adicional no crecemento das células. O problema máis común é como asegurar a uniformidade das células despois de engadir a mostra e minimizar o impacto de cambiar o medio no estado de crecemento das células.

Pregunta:
As tapas de placas de cultivo de 96 e 24 pozos ou pratos Petri son moi soltas, o que é conveniente para a ventilación, pero tamén se inclinarán bacterias, moldes e outros contaminantes?

Resposta:
A tapa é moi solta, que pertence á cultura semi-aberta, e o propósito desta é ventilar (de feito, é facer que o CO2 fóra do prato de cultura intercambie completamente co prato de cultura e manteña o valor do pH da cultura medio).
Todo ten vantaxes e desvantaxes, o que por suposto aumenta a posibilidade de contaminación. Ademais, isto fai que o líquido no prato se evapore, o que é notable por dosificación precisa de drogas. Polo tanto, son necesarias as seguintes dúas medidas: a. O aire da incubadora debe estar limpo (luz ultravioleta regular, lavado de alcol e a incubadora debe abrirse e pecharse o menos posible) b. A humidade da incubadora debe manterse sempre no 100% (a pía con auga destilada estéril colocada na incubadora).
Do mesmo xeito que un prato Petri, tamén é un recipiente cunha tapa de cabeza e non se contaminará. Principalmente debido á presión negativa do fluxo de aire xerado polo bordo "L" da cuberta, hai microorganismos unidos ao po e o po transportado polo fluxo de aire non pode pasar polo bordo da cuberta que xera presión negativa. O efecto de ventilación é só pola difusión do aire e non se xerará ningún fluxo de aire, polo que só respirará e non penetrará as bacterias.

Pregunta:
Usando unha placa de 24 pozos, hai operacións nalgúns dos pozos (no banco ultra-limpo) e hai células que se cultivan noutros pozos. Preocúpame que isto causará contaminación. Non sei a que prestar atención?

Resposta:
Se a operación está normalizada no banco ultra-limpo, debería estar ben. Creo que podes facer un uso total da cuberta da placa de cultivo, intentar expoñer só os buracos a operar e cubrir os outros buracos con portadas.
Considere de xeito exhaustivo antes de usar e facer uso total de todos os buracos; Se só precisa usar algúns buracos, só pode usar un lado e cubrir o resto cunha tapa. Estou acostumado a usar o burato dereito primeiro (é conveniente engadir mostras á man dereita).

Ao operar, use unhas diapositivas de vidro para levantar un lado do taboleiro, non abra a tapa completamente, normalmente non hai problema.
Distribución e solucións desiguales

Pregunta:
As células están inoculadas na placa de cultivo e as células sempre se reúnen na parte periférica, como tratar con ela?

Resposta:
¿Podo preguntar como se mesturan as túas celas? ¿É canalizando ou sacudindo o prato de cultura? Se é este último e se se axita nun círculo, é moi probable que as células sexan lanzadas á parte periférica debido á forza centrífuga, obtendo menos células no medio. Máis de catro semanas!
Aquí tes un bo xeito: antes de cultivar a placa de semente, coloque a placa de cultivo na incubadora durante unhas horas de saturación e logo sácaa. A forza debe ser lixeira ao plantar as células. Engadir lentamente permite que a suspensión celular flúa nos pozos da placa e as células cultivadas crecen basicamente uniformemente. Non te esquezas de axitar nunca cun axitador, ou as túas celas se agruparán como dixeches.
Canto máis pequeno sexa o diámetro do burato da placa de cultivo, máis obvio é este fenómeno. Este fenómeno é inevitable para placas de 24 e 96 pozos, porque o líquido adhírese á parede para que a solución de cultura no pozo non forme un nivel de líquido, pero a periferia é alta, como un espello cóncavo. Non obstante, ao usar estes dous tipos de placas de orificio, non é posible engadir unha cantidade suficiente de solución de cultivo debido á necesidade de intervención adicional, de xeito que as células aparezan "colección de bordes" xunto coa solución de cultivo. Depende dos indicadores que debes observar. Se é MTT, a inmunohistoquímica afectará os resultados debido á capa celular.
Ao dixerir células, preste atención a canalizar uniformemente para evitar grupos celulares e a cantidade de solución de cultivo no pozo debería ser suficiente. Xeralmente, engade suficiente solución de cultivo ao inocular e cambia a solución unha vez ao engadir intervención. A cantidade de solución de cultivo engadida á solución de intervención é igual á cantidade de solución de cultivo no momento da inoculación, neste caso, mellorarase o fenómeno do "bordo", polo que tamén pode probalo.

Pregunta:
O que fixen foi o experimento de formación de placas. É mellor estender as células nunha capa uniforme. A maioría dos buracos están ben cando se inocula o virus e algúns deles non son uniformes. Hai grandes diferenzas no grupo celular. Gustaríame preguntarche que método empregas ao engadir celas?

Resposta:
É fundamental pipear as células nunha suspensión dunha soa célula despois da dixestión. Asegúrese de que o número de células en cada pozo é consistente ao dividir a placa.
Por suposto, tamén hai factores de procesamento. O paralelismo entre os pozos tamén é moi importante. Por exemplo, ao engadir medicamentos, mestura o medicamento despois da dilución para asegurarse de que a concentración de cada pozo sexa consistente.
Ademais, ao engadir células e drogas, o grupo de proba e o grupo control deben engadirse á súa vez para evitar a diferenza de densidade celular e concentración de medicamentos causados ​​pola secuencia de engadir mostras.

Pregunta:
O soplado xa é uniforme, pero a táboa, 6 buracos e 24 buracos son sempre desiguales e un pouco concentrados no medio. Ademais, é obvio que o reconto está feito e despois dun ou dous días, a densidade de cada burato é diferente, o que afectará á detección. Hai un bo xeito?

Resposta:
Se usas unha pipeta Pasteur, non chupa demasiado cada vez, porque as células da pipeta afundiranse automaticamente, moitas veces o número de células nos primeiros buratos é grande, e a suspensión celular adoita ser uniforme, e o líquido vontade Siga a ruta en forma de S.
Se usa unha pipeta, as puntas deben procesarse e eliminarse para evitar danar as células, de xeito que cada vez que se toma o líquido corresponde a un pozo. É máis preciso engadir un burato individual con punta. Pero tamén preste atención á mestura da suspensión.

Para configurar un grupo paralelo, N debe ser o suficientemente grande (pode calculalo).

Non tremer despois do chapado, xa que axitará fará que as células se agregen cara ao centro. É mellor planificar unha vez.

A placa de cultivo celular poroso Yongyue Medical sempre considerou o control de calidade como a vida da empresa e seguiu a mellora continua da competitividade empresarial. A compañía sempre se adhire ao espírito empresarial de obedecer as leis e regulacións, sendo estrito coa autodisciplina, sendo lento e atrevido a asumir a responsabilidade como estándar en funcionamento, mantendo e ampliando o mercado cunha excelente calidade e excelente servizo e atender ao servizo necesidades dos clientes en maior medida. . Win-Win cos clientes é o noso obxectivo de desenvolvemento. Yongyue Medical! O teu compañeiro de confianza. Estamos dispostos a cooperar sinceramente contigo para crear un futuro mellor.